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2ª série · Biologia
Os microrganismos · As bactérias

Cultura e controle de microrganismos

Cultivar uma bactéria no laboratório é, no fundo, alimentá-la e vigiá-la. Controlar o seu crescimento, seja num hospital, numa fábrica de iogurte ou na geladeira da sua casa, é impedir que ela cresça onde não deve. E entender por que algumas bactérias já não respondem aos antibióticos é um dos grandes desafios de saúde pública deste século.

Meios de cultura e técnica asséptica

Se você passar um cotonete estéril numa mesa e depois num vidro vazio, nada aparece no dia seguinte. Mas se passar numa placa com ágar a 25 °C, surgem dezenas de pontos brilhantes visíveis a olho nu. O que uma bactéria precisa para se multiplicar fora do seu ambiente natural?

Comparação entre um meio sólido, uma placa de Petri com ágar em que crescem colônias isoladas de dois tipos, e um meio líquido, um frasco com caldo turvo em que as células ficam dispersas por todo o volume placa de Petri colônias isoladas ágar meio sólido (ágar em placa) frasco células dispersas meio líquido (caldo)

Para que só cresça o que você semeou, o trabalho segue a técnica asséptica: evitar que microrganismos do ambiente, das mãos ou do ar contaminem a cultura (e que a cultura escape para fora). Na prática, flamba-se a alça de inoculação (alça de platina) até ficar em brasa, para matar qualquer célula que ela carregue, e trabalha-se perto da chama do bico de Bunsen, cujas correntes de convecção empurram o ar com microrganismos para longe da placa aberta.

Pratica★☆☆Por começar
O que é um meio de cultura e que condições (nutrientes, temperatura, pH, oxigênio) são controladas ao cultivar bactérias no laboratório? Indique a diferença entre um…

O que é um meio de cultura e que condições (nutrientes, temperatura, pH, oxigênio) são controladas ao cultivar bactérias no laboratório? Indique a diferença entre um meio sólido e um meio líquido.

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Pratica★☆☆Por começar
Explique o que é a técnica asséptica de trabalho no laboratório de microbiologia e justifique o sentido de duas práticas concretas: flambar a alça de semeadura até ficar…

Explique o que é a técnica asséptica de trabalho no laboratório de microbiologia e justifique o sentido de duas práticas concretas: flambar a alça de semeadura até ficar em brasa e trabalhar na proximidade da chama do bico de Bunsen.

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Pratica★☆☆Por começar
Os vírus não se multiplicam em placas de ágar. Justifique o motivo (o que falta a eles para se multiplicarem autonomamente?) e indique quais sistemas os laboratórios…

Os vírus não se multiplicam em placas de ágar. Justifique o motivo (o que falta a eles para se multiplicarem autonomamente?) e indique quais sistemas os laboratórios utilizam para cultivá-los (culturas celulares, ovos embrionados).

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A curva de crescimento bacteriano

Curva de crescimento bacteriano em sistema fechado com quatro fases numeradas: latência (lenta), exponencial (rápida), estacionária (plana) e declínio (descendente) nº de bactérias tempo 1 latência 2 exponencial 3 estacionária 4 declínio

Cultura em grande escala: o biorreator

Na indústria, o cultivo acontece em biorreatores (ou fermentadores): grandes tanques fechados em que microrganismos produzem iogurte, cerveja ou insulina recombinante. Sensores e controladores mantêm de forma contínua a temperatura, o pH, o oxigênio dissolvido, a agitação (que mistura nutrientes e células) e a espuma (que se combate com antiespumante).

Por quê? Fora da faixa ideal, as células crescem mal ou morrem. Se o pH sai do ponto ótimo, por exemplo, as enzimas perdem eficiência e o rendimento do produto cai. Se falta oxigênio num processo aeróbio, o metabolismo muda e o produto se altera ou se perde.

Pratica★★☆Por começar
O gráfico representa a curva de crescimento de uma cultura bacteriana em sistema fechado, com suas quatro fases indicadas com números (1 a 4). Nomeie cada fase e…

O gráfico representa a curva de crescimento de uma cultura bacteriana em sistema fechado, com suas quatro fases indicadas com números (1 a 4). Nomeie cada fase e explique o que acontece com os nutrientes e os resíduos em cada uma delas.

nº de bactérias (log) tempo 1 2 3 4
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Pratica★★☆Por começar
Uma bactéria se divide a cada $20$ minutos. Partindo de $1\,000$ células em fase exponencial, calcule quantas existirão após duas horas (quantas gerações ocorrem?). Em…

Uma bactéria se divide a cada $20$ minutos. Partindo de $1\,000$ células em fase exponencial, calcule quantas existirão após duas horas (quantas gerações ocorrem?). Em seguida, justifique por que o crescimento exponencial não pode se manter numa cultura fechada (que fatores o limitam?).

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Pratica★★☆Por começar
Um biorreator industrial produz iogurte, cerveja ou insulina em grande escala. Explique que parâmetros são controlados de forma contínua (temperatura, pH, oxigênio…

Um biorreator industrial produz iogurte, cerveja ou insulina em grande escala. Explique que parâmetros são controlados de forma contínua (temperatura, pH, oxigênio dissolvido, agitação, espuma) e justifique o que acontece com o produto se dois deles, à sua escolha, ficarem descontrolados.

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Esterilização, desinfecção e conservação de alimentos

Uma conserva bem fechada pode durar anos fora da geladeira, o leite aberto dura poucos dias, e a água sanitária limpa a bancada da cozinha, mas machucaria um ferimento. Por que não usamos o mesmo procedimento para conservar alimentos, limpar objetos e tratar um paciente?

Três níveis de controle microbiano: esterilização elimina tudo, inclusive endósporos; desinfecção atua em superfícies e deixa endósporos; antissepsia reduz bactérias na pele Esterilização autoclave · mata tudo, até endósporos Desinfecção superfícies inanimadas · endósporos podem sobreviver Antissepsia pele e tecido vivo · produtos suaves

Outras formas de desinfetar: o álcool a 70% e a água sanitária (hipoclorito). O sabão também funciona contra vírus envelopados, porque suas moléculas dissolvem o envelope lipídico e o vírus se desfaz.

Conservação de alimentos

Cada método de controle microbiano nos alimentos tem um princípio diferente:

Método Princípio Exemplo
Pasteurização (72 °C por 15 s) Mata patógenos vegetativos, sem esterilizar leite pasteurizado
Esterilização UHT (temperatura muito mais alta) Mata praticamente tudo, inclusive endósporos leite longa vida
Refrigeração e congelamento Inibem (retardam metabolismo e divisão) geladeira, freezer
Salga, açúcar, defumação Dificultam o crescimento ao tirar água disponível (osmose) carne-seca, doce em calda

A pasteurização, criada por Louis Pasteur, controlou no leite doenças históricas como tuberculose e brucelose.

Pratica★☆☆Por começar
Distinga esterilização, desinfecção e antissepsia, e dê um exemplo de situação (centro cirúrgico, bancada de cozinha, ferimento superficial) em que se aplica cada uma…

Distinga esterilização, desinfecção e antissepsia, e dê um exemplo de situação (centro cirúrgico, bancada de cozinha, ferimento superficial) em que se aplica cada uma delas.

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Pratica★☆☆Por começar
Cite quatro métodos de controle microbiano na indústria alimentícia (pasteurização, esterilização UHT, refrigeração e congelamento, salga ou cura) e explique o princípio…

Cite quatro métodos de controle microbiano na indústria alimentícia (pasteurização, esterilização UHT, refrigeração e congelamento, salga ou cura) e explique o princípio em que cada um se baseia (mata, inibe ou dificulta o crescimento?).

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Pratica★★☆Por começar
Explique em que consiste a pasteurização (temperatura e tempo, por exemplo $72\ \text{°C}$ durante $15$ segundos), por que motivo não esteriliza o alimento (o que…

Explique em que consiste a pasteurização (temperatura e tempo, por exemplo $72\ \text{°C}$ durante $15$ segundos), por que motivo não esteriliza o alimento (o que sobrevive?) e que doenças históricas ajudou a controlar no leite (tuberculose, brucelose).

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Pratica★★☆Por começar
Compare a eficácia da água sanitária, do álcool a $70\ \%$ e do sabão contra bactérias e vírus envelopados. Explique por que o álcool a $70\ \%$ desinfeta melhor do que…

Compare a eficácia da água sanitária, do álcool a $70\ \%$ e do sabão contra bactérias e vírus envelopados. Explique por que o álcool a $70\ \%$ desinfeta melhor do que o álcool quase puro (papel da água na desnaturação de proteínas e na penetração) e que efeito o sabão tem exatamente sobre um envelope viral lipídico.

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Antibióticos, resistência e antibiograma

Placa de Petri com antibiograma de difusão em disco: quatro discos de antibiótico com halos de inibição de tamanhos diferentes (muito grande, grande, pequeno e ausente) halo grande: sensível halo pequeno: intermediário halo grande: sensível sem halo: resistente

No antibiograma, discos de papel com antibióticos são colocados sobre uma placa semeada com a bactéria. Onde o antibiótico age, forma-se um halo de inibição sem crescimento. O resultado informa ao médico se a bactéria é sensível, intermediária ou resistente a cada droga. Sem essa informação, prescrever "no escuro" pode levar a um tratamento ineficaz e favorecer resistências; por isso, sempre que possível, o teste vem antes.

De onde vêm os antibióticos

Muitos antibióticos são produtos naturais de bactérias do solo, como os estreptomicetos. Ao liberar essas substâncias, o organismo produtor trava uma guerra química: elimina ou freia competidores e fica com mais nutrientes. Por isso, as bactérias vizinhas também têm, desde sempre, genes de resistência. Hoje, descobrir novos antibióticos ficou mais difícil: as fontes fáceis já foram exploradas, o desenvolvimento é caro e demorado, e a resistência surge rápido, o que reduz o retorno para a indústria.

Pratica★★☆Por começar
Muitos antibióticos são produtos naturais de bactérias do solo (estreptomicetos). Explique que vantagem evolutiva a síntese de um antibiótico confere ao organismo…

Muitos antibióticos são produtos naturais de bactérias do solo (estreptomicetos). Explique que vantagem evolutiva a síntese de um antibiótico confere ao organismo produtor (guerra química pelos nutrientes) e analise por que razão a descoberta de novos antibióticos desacelerou nas últimas décadas.

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Resistência: seleção natural em ação

A resistência também se espalha entre bactérias sem parentesco por transferência horizontal de genes, em oposição à herança «vertical», de célula-mãe para células-filhas. Há três mecanismos:

Mecanismo Como o DNA passa de uma bactéria a outra
Conjugação contato direto entre duas bactérias, por uma ponte (fímbria sexual); passa-se em geral um plasmídeo
Transformação a bactéria capta DNA livre do ambiente (de células mortas)
Transdução um bacteriófago (vírus) carrega pedaços de DNA de uma bactéria para outra

A conjugação de plasmídeos é a grande responsável pela disseminação de resistências, porque um único contato pode transmitir vários genes de uma vez.

Pratica★☆☆Por começar
O que é a transferência horizontal de genes e em que ela se distingue da hereditariedade «vertical» dos progenitores para a descendência? Nomeie os três mecanismos dela…

O que é a transferência horizontal de genes e em que ela se distingue da hereditariedade «vertical» dos progenitores para a descendência? Nomeie os três mecanismos dela nas bactérias.

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Pratica★☆☆Por começar
Distinga um antibiótico bactericida de um bacteriostático, apresente um exemplo de cada tipo (penicilina versus tetraciclinas) e explique o que acontece com a população…

Distinga um antibiótico bactericida de um bacteriostático, apresente um exemplo de cada tipo (penicilina versus tetraciclinas) e explique o que acontece com a população bacteriana ao suspender cada um deles.

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Pratica★☆☆Por começar
O que é um antibiograma e como ele é realizado (discos de antibiótico sobre a placa semeada)? Explique que informação ele transmite ao médico (sensível, intermediário,…

O que é um antibiograma e como ele é realizado (discos de antibiótico sobre a placa semeada)? Explique que informação ele transmite ao médico (sensível, intermediário, resistente) e por que razão não se deve prescrever um antibiótico sem essa informação, sempre que seja possível obtê-la.

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Pratica★★☆Por começar
Explique, por meio da seleção natural, como surge uma população bacteriana resistente a um antibiótico quando o tratamento é interrompido antes do tempo, e por que o…

Explique, por meio da seleção natural, como surge uma população bacteriana resistente a um antibiótico quando o tratamento é interrompido antes do tempo, e por que o antibiótico não «cria» a resistência.

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Pratica★★☆Por começar
Descreva os três mecanismos de transferência horizontal de genes bacteriana — conjugação, transformação e transdução —, indicando qual veículo transporta o DNA em cada…

Descreva os três mecanismos de transferência horizontal de genes bacteriana — conjugação, transformação e transdução —, indicando qual veículo transporta o DNA em cada caso e qual deles atua na disseminação de resistências.

Resolver

Voltando ao começo: dar de comer à bactéria é preparar o meio de cultura; impedir que ela cresça onde não deve é esterilizar, desinfetar ou conservar; e os antibióticos, usados sem cuidado, acabam selecionando as bactérias que deixam de responder a eles.

Resumo

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